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Vorbestellen	Zweigstelle: 07., Urban-Loritz-Pl. 2a	Standorte: NN.BC Rein / College 6a - Naturwissenschaften	Status: Entliehen	Frist: 11.05.2024	Vorbestellungen: 0

Aktueller Führer durch die Vielfalt der molekularbiologischen Methoden.

 

 

 

Von den Grundlagen der Laborarbeit über aktuelle Methoden und Verfahren bis zum Fortgeschrittenenwissen

Die Molekularbiologie hat sich in den letzten Jahren rasant weiterentwickelt. Vor wenigen Jahren noch völlig unbekannte Technologien und Verfahren, wie die Modulare Klonierung, PCR-basierte Klonierungen oder das Gibson Assembly gelten heute als Standard.

 

 

 

Dies ist das bislang einzige Methodenbuch, das die neuen, inzwischen weit verbreiteten Verfahren, wie Gibson Assembly, Golden Gate, MoClo und Genom Editierung, beschreibt.

 

 

 

Diese und viele andere zukunftsweisenden Verfahren wurden aussagekräftig illustriert, zahlreiche Wissensboxen, Tipps und Protokolle machen den Titel zum perfekten Praxisbegleiter. Ideal für Bachelor- und Master-Studierende und für Berufspraktiker!

 

 

 

Aus dem Inhalt:

Vorwort zur 1. Auflage 12 // Vorwort zur 2. Auflage 13 // 1 Das Leben und seine Bestandteile // 1.1 Der Aufbau von DNA 1.4 Proteine 26 / und RNA 17 / 1.5 Die Zelle 30 / 1.2 Der genetische Code 20 // 1.3 Die Gene 22 / 1.3.1 Die Genstruktur in Prokaryoten 22 / 1.3.2 Genstruktur in Eukaryoten 24 // 2 Grundlagen der Arbeit im Labor // 2.1 Wasser > 34 2.9 Probenlagerung 46 // 2.2 Messung des pH-Werts > 35 2.10 Steriles Arbeiten 46 // 2.3 Puffer , 36 2.11 Geräte für den Aufschluss / von Geweben 49 / 2.4 Waagen , 36 / 2.12 Pflege und Aufzucht / 2.5 Mikropipetten , 38 von Escherichia c o li 51 / 2.12.1 Nährmedien 52 / 2.6 Gefäße im Labor 40 2.12.2 Antibiotika 53 / 2.12.3 Lagerung von Bakterien 55 / 2.7 Zentrifugen 41 // 2.8 Mischen und Konzentrieren , 44 / 2.8.1 Konzentrieren , 45 / 2.8.2 Pufferwechsel 45 // 3 Aufreinigung von Nukleinsäuren // 3.1 Gegenspieler erfolgreicher / DNA- und RNA-Isolationen 59 / 3.1.1 Nukleasen 59 / 3.1.2 Scherkräfte 60 / 3.1.3 Chemische Verunreinigungen 60 / 3.1.4 EDTA und zweiwertige Ionen: / das Yin und Yang der / Molekularbiologie 61 / 3.2 Extraktion von / Nukleinsäuren 62 // 3.3 Die weitere Aufreinigung / der DNA 64 / 3.3.1 Phenolextraktion 64 / 3.3.2 Ethanolfällung 65 / 3.3.3 Isopropanolfällung 67 / 3.3.4 PEG-Fällung 68 / 3.3.5 Entfernen von Polysacchariden / mit CTAB 68 / 3.3.6 Tropfendialyse 68 / 3.4 Silica Matrices 69 / 3.4.1 Von Nukleinsäuren und / Silica Matrices 69 // 3.4.2 Übersicht über den Einsatz / von Kits 70 / 3.5 Ausgewählte DNA- / Aufreinigungsverfahren 71 / 3.5.1 Die Plasmidpräparation / aus E. coli 71 / 3.5.2 Die Isolation von DNA aus / Pflanzen mit CTAB 72 / 3.5.3 Isolation von DNA aus Blut / oder Zellkulturen 74 / 3.5.4 Isolation hochmolekularer DNA 75 / 3.6 Die Isolation von RNA 76 // 3.7 Tipps zum Erzielen hoher / Ausbeuten bei der Isolation / von Nukleinsäuren 78 // 3.8 Quantifizierung von / Nukleinsäuren 79 / 3.8.1 DNA-Bestimmung / im Photometer 79 / 3.8.2 Konzentrationsbestimmung / mittels optischer Dichte 81 // 4 Polymerase-Kettenreaktion // 4.1 Prinzip der Polymerase- / Kettenreaktion 85 // 4.2 Die Komponenten der PCR 86 / 4.2.1 Die Ausgangs-DNA 86 / 4.2.2 Thermostabile DNA-Polymerasen. 86 / 4.2.3 Puffer, Magnesium und dNTPs 89 / 4.2.4 Prim er 91 / 4.3 Geräte für die PCR 93 // 4.4 Die Standard-PCR 94 // 94 / 94 // 4.5.2 Gradienten-PCR und / Touch-Down PCR 96 / 4.5.3 Nested PCR 97 / 4.5.4 Multiplex PCR 97 / 4.5.5 Einfuhren von / Restriktionsschnittstellen 98 / 4.5.6 Reverse Transkriptions-PCR / (RT-PCR) 99 / 4.5.7 Kolonie-PCR 102 / 4.5.8 Quantitative PCR 103 / 4.6 Anwendungen der PCR 105 // Optimierung der / 4.5 Ausgewählte PCR-Methoden PCR-Reaktion / 4.5.1 Two-Step PCR // 4.7 // 5 Klonieren für Einsteiger / 5.1 Restriktionsenzyme 109 / 5.1.1 Restriktionsenzyme des Typs I I 110 / 5.1.2 Restriktionsenzyme im Labor 113 / 5.1.3 Methylasen und Typ IIM-Enzyme 115 / 5.1.4 Typ IIS-Enzyme 116 / 5.2 Ligation 116 // 5.3 (De)Phosphorylierung / von DNA 118 / 5.3.1 Dephosphorylierung 118 / 5.3.2 Phosphorylierung 119 / 5.4 Enzyme für / spezielle Aufgaben 121 // 5.5 Die Transformation / von E. co/i 121 // 5.6 Der Weg zum Monierten Gen 123 // 5.7 Der ungerichtete Einbau einer / ampiifizierten DNA in einen / Vektor 123 / 5.7.1 Die Klonierung über eine / Restriktionsstelle 124 / 5.7.2 TA-Klonierung und TOPO-Cloning 125 / 5.7.3 Klonierung in ein Letal-Plasmid 126 / 5.7.4 Zyklische Blunt End Klonierung 126 / 5.8 Der gerichtete Einbau von DNA / in einen Vektor 127 // 5.9 Wenn es mal nicht klappt 129 // 6 Vektoren // 6.1 Plasmide ,. 132 6.8 Künstliche Chromosome: / YACs, BACs und PACs 148 / 6.2 Klonierungsplasmide. 135 / 6.2.1 Blau-Weiß-Screening , 135 6.9 Hefen als Klonierungs- und / 6.2.2 Letalvektoren. 138 Expressionssystem 149 / 6.9.1 Hefe als Modellorganismus 149 / 6.3 Expressionsplasmide 139 6.9.2 Vektoren für H efe 151 / 6.3.1 Promotoren für 6.9.3 Transformation von H e fe 152 / Expressionsvektoren ,. 140 / 6.3.2 Weitere regulative Sequenzen 141 6.10 Pflanzen als Bioreaktoren 152 / 6.3.3 Expression in das Periplasma ,. 141 6.10.1 Die Transformation von Pflanzen 153 / 6.3.4 Einschlusskörperchen 6.10.2 Transiente / [Inclusion Bodies] 141 Transformationsverfahren 155 / 6.3.5 Tag-Sequenzen ,. 142 / 6.11 Die Transformation / 6.4 Reportergene 142 von Säugetieren und / tierischen Zellkulturen 156 / 6.5 Phagen ,. 146 / 6.11.1 Säugetiere als Modellorganismen. 156 / 6.11.2 Säuger-Zellkulturen 157 / 6.6 Phagemide 147 6.11.3 Vektoren für tierische Zellen 158 / 6.11.4 Transfektion tierischer / 6.7 Shutt/e-Vektoren 147 Zellkulturen 159 // 7 Elektrophorese und Hybridisierung von Nukleinsäuren // 7.1 Agarose-Gelelektrophorese 7.5 Fehlersuche bei Agarose- / von DNA 162 Gelelektrophorese 170 // 7.2. Die Detektion der DNA 7.6 Hybridisierung von / im Gel 167 Nukleinsäuren 171 / 7.6.1 Southern und Northern Blot 173 / 7.3 Präparative Agarosegele 169 7.6.2 Herstellung der Sonde und / Hybridisierung 174 / 7.4 Auftrennen von RNA / im Agarosegel 170 7.7 Microarrays 174 // 8 Fortgeschrittene Klonierung // 8.1 Klonsammlungen und / synthetische Gene 179 // 8.6 Biobricks 189 / 8.1.1 Klonsammlungen 180 8.7 Nahtlose / 8.1.2 Synthetische Gene und Klonierungsverfahren 189 / Genfragmente 180 8.7.1 Golden Gate Klonierung 190 / Rekombinase-basierte // 8.7.2 Cut-Ligation Verfahren 191 / 8.2 8.7.3 Multiple Insertionen mittels / Klonierung 181 / 8.7.4 // Golden Gate Klonierung / Golden Gate basierte Tool Kits am // 192 / 8.3 Mutageneseverfahren 183 Beispiel des MoClo Kits 192 / 8.4 PCR-basierte 8.8 Gibson Assembly 195 / Klonierungsverfahren: / RF-Cloning und oePCR 186 8.9 Vergleich der Verfahren 198 // 9 Proteinaufreinigung / 9.1 Homogenisation 203 9.5 Quantifizierung / 9.1.1 Proteasen 204 von Proteinen 217 / 9.1.2 Phenoloxidasen 206 9.5.1 Proteinbestimmung / nach Bradford 217 / 9.2 Extraktion von Proteinen 207 9.5.2 BCA-Test 219 / 9.2.1 Homogenisationspuffer 207 9.5.3 Welchen Test benutzen? 220 / 9.2.2 Abtrennen von Zell- und / Gewebetrümmern 208 9.6 Aufreinigungsverfahren / 9.2.3 Fraktionierung des Rohextrakts 208 für getaggte Proteine / aus E. c o li 221 / 9.3 Dialyse und Konzentrierung 211 9.6.1 Bakterienanzucht und / Homogenisation 222 / 9.4 Weitere 9.6.2 Weitere Aufreinigung des / Aufreinigungsschritte 212 heterologen Proteins 224 / 9.4.1 Chromatographie 213 / 9.4.2 Chromatographische / Trennprinzipien 215 / 9.4.3 Magnedc Beads 216 // 10 Gelelektrophorese von Proteinen // 10.1 Die Polyacrylamid- / Gelelektrophorese (PAGE) 229 // 10.2 Die denaturierende / SDS-PAGE 229 / 10.2.1 Herstellung eines Proteinextrakts / für die SDS-Gelelektrophorese 229 / 10.2.2 Herstellen des Gels 232 / 10.2.3 Der Gellauf 235 // 10.4 Weitere Elektrophorese­ / verfahren für Proteine 239 / 10.4.1 Native PAGE 239 / 10.4.2 Isoelektrische Fokussierung 239 / 10.4.3 2-D-Gelelektrophorese 239 / 10.5 Western Blotting 241 // 10.6 Massenspektrometrische / Verfahren 246 // 11 Immunbiochemische Methoden // 11.1 Antikörper 251 11.3 ELISA 261 / 11.3.1 Sandwich-ELISA 263 / 11.2 Prinzipien immun­ / biochemischer Verfahren 254 // 11.3.2 Kompetitiver ELISA 265 / 11.2.1 Immunpräzipitation 254 11.4 Immunfärbung nach / 11.2.2 Trägerbasierte Immunfärbung 256 Western Blot 266 / 11.2.3 Immobilisierung des Antigens 257 / 11.2.4 Blocken überschüssiger 11.5 Immunaffinitäts­ / Bindestellen 257 chromatographie 269 / 11.2.5 Detektion der Bindung 257 / 11.2.6 Antikörper-Kaskaden 259 11.6 Weitere Antikörper­ / 11.2.7 Spezifische und basierte Methoden 270 / unspezifische Bindungen 260 11.6.1 Rekombinante Antikörper 270 / 11.6.2 Phage Display und scFv 271 / 11.6.3 Immunhistochemische Verfahren. 273 / 11.6.4 Markierung von Zellen 274 // 12 Fortgeschrittene Verfahren // 12.1 DNA-Sequenzierung 278 12.4 Analyse der Genfunktion 286 / 12.1.1 Sequenzierung nach Sänger 278 12.4.1 Reverse Genetik und / 12.1.2 Herstellen von Proben für Gene Targeting 286 / die DNA-Sequenzierung 280 12.4.2 RNAi 287 / 12.4.3 Durchführung von / 12.2 Next Generation siRNA-Experimenten 288 / Sequenzierung 281 / 12.5 Genom Editierung 289 / 12.3 Von den ¿Omics¿ / zur Systembiologie 285 // 13 Bioinformatik // 13.1 Datenbanken 296 13.4 Sequenzsuche mit einer / Sequenz(BLAST) 300 / 13.2 Dateiformate 298 / 13.5 Bioinformatik zur Planung / 13.3 Sequenzsuche anhand von / Stichwörtern (Entrez) ,. 300 // der Laborarbeit 305 // 14 Anhang // A 1 Sicherheit im Labor 308 / A2 Die 10 goldenen Laborregeln 309 / A3 Das Laborbuch und die finale Arbeit 311 / Verzeichnis der ¿Gut zu wissen¿-Boxen 313 / Abbildungsverzeichnis 314 / Verzeichnis der M aps 316 / Verzeichnis der Protokolle 316 / Tabellenverzeichnis 317 / Abkürzungsverzeichnis 318 / Sachverzeichnis 321